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基因表达载体的构建，即目的基因与运载体结合，是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心，其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。
构建条件：
1、必须能够在宿主细胞中复制，使重组基因能够在宿主基因中复制，从而稳定保存下来，这是作为运载体的必须条件。
2、具有多个限制酶切点，从而可以使不同的粘性末端与之相连，增强实用性。
3、拥有标记基因，方便质粒进入宿主细胞后容易被检测出来，以便检测目的基因是否导入受体。
