影响PCR扩增结果的因素

1、引物：引物到用户手头前都是以干粉形式存在的，干粉很容易丢掉，引物溶解后可以测定一下OD，将所有引物的浓度调整到一致，对实验有一定帮助。2、高温聚合酶：高温聚合酶是非常稳定的，除非有蛋白酶的污染。但是不同公司提供的酶扩增是有差异的，活性定量和标示未必相同。选用表现一贯稳定的酶，而不是最便宜的。3、缓冲液：缓冲液一般不容易出问题，只是使用前需要彻底融化混匀使用。4、温度：变性和退火温度是主要需要考虑的。5、模板：PCR 的关键之一，模板不是越多越好。6、dNTP： dNTP是PCR扩增体系中最不稳定的，反复冻融会使dNTP发生降解。7、Mg2+：是TAQ活性所必须的，浓度过高过低对反应都有比较大的影响。过低，合成效率会下降，过高，非特异性会加大。

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导读1、引物：引物到用户手头前都是以干粉形式存在的，干粉很容易丢掉，引物溶解后可以测定一下OD，将所有引物的浓度调整到一致，对实验有一定帮助。2、高温聚合酶：高温聚合酶是非常稳定的，除非有蛋白酶的污染。但是不同公司提供的酶扩增是有差异的，活性定量和标示未必相同。选用表现一贯稳定的酶，而不是最便宜的。3、缓冲液：缓冲液一般不容易出问题，只是使用前需要彻底融化混匀使用。4、温度：变性和退火温度是主要需要考虑的。5、模板：PCR 的关键之一，模板不是越多越好。6、dNTP： dNTP是PCR扩增体系中最不稳定的，反复冻融会使dNTP发生降解。7、Mg2+：是TAQ活性所必须的，浓度过高过低对反应都有比较大的影响。过低，合成效率会下降，过高，非特异性会加大。